艾滋病检测方法的详细介绍
艾滋病主要的检测方法分为:抗体检测、抗原检测、核酸检测病毒分离(一)抗体检测分为:
酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、快速检测法(通常叫金标法): 也是抗体检测的一种方法,根据免疫层
析法的原理,用于HIV抗体检测的定性检测。
(二)抗原检测分为:
解离免疫复合物法或浓缩P24抗原:用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太
少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原,来提高敏感性。
(三)核酸检测
PCR法检测HIV基因:用PCR法检测HIV基因,具有快速、高效、敏感和特异等优点,目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾
滋病的研究中。
(四)病毒分离
共培养法:即用正常人外周血液分离单个核细胞,加PHA刺激并培养后,加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。
各种方法解释:
1、酶联免疫吸附试验(ELISA)--酶联法:
ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物,酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观察结果。初筛用的HIV ELISA试剂目前已经发展到第四代检测试剂。第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高。第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应板,由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。第四代试剂则在第三代的基础上进一步增加了P24抗原的检测,把HIV抗原和抗P24的抗体同时包被反应板,可同时检测血清中的HIV抗体和P24抗原。
2、免疫荧光试验(IFA):
免疫印迹试验主要用于确认试验,基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS?PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后,即可使有反应的抗原?抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。有报告说,免疫印迹试验的特异性不是很好, 有大约2%的假阳性率,但免疫印迹试验依然是目前最常用的HIV确认试验。
3、金标法:我们知道,在进行艾滋病检测时,会通过显示或不显示红线来表示检测结果,那么为什么艾滋病检测试纸会有红线呢?这是因为当HIV抗体与艾滋病检测试纸上特有的物质相遇后,会发生化学反应,然后显示出一条红线。采用金标法的艾滋病检测试纸,如艾康艾滋病检测试纸,上面的特有物质叫做胶体金,这就是金标法。通俗的讲,就是利用胶体金与HIV抗体反应,然后显示红线的方法。
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